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阿洛夫奧斯特線蟲PCR檢測試劑盒反應五要素

發(fā)表時間:2021-03-23
阿洛夫奧斯特線蟲PCR檢測試劑盒反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以最低引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

試劑使用須知:
(1)請參照相關法規(guī)、文獻、MSDS等信息,理解并掌握好試劑的特性,再進行安全操作。
(2)通常購買試劑時一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話,更加注意其他保管和管理。
(3)萬一試劑操作者并非專業(yè)技術人員。必須在專業(yè)人士的指導監(jiān)督下進行操作。對于使用后的廢棄物,不要或者舊的試劑,應按照相關法律法規(guī)正當處理。
(4)購買后,請務必確認標簽上的注意事項;做好預防顛倒,摔壞的措施和管理體制;在使用前再次確認標簽上的注意事項,做好必要的安全對策;對沒有標明其危害特性、有害特性的,也要慎重地進行操作;必須帶好防護用具,小心翼翼進行操作。
小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA3 elisa檢測試劑盒
小鼠心肌營養(yǎng)素1(CT-1)elisa檢測試劑盒
小鼠心肌肌球蛋白重鏈(MHC)自身抗體elisa檢測試劑盒
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小鼠腺苷高半胱氨酸酶(AHCY)elisa檢測試劑盒
小鼠腺病毒IgG抗體elisa檢測試劑盒
小鼠線粒體呼吸鏈復合物Ielisa檢測試劑盒
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小鼠纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)elisa檢測試劑盒
小鼠纖溶酶抗纖溶酶復合物(PAP)elisa檢測試劑盒
小鼠纖連蛋白(FN)elisa檢測試劑盒
小鼠細小病毒(PV)抗體(IgG)elisa檢測試劑盒
小鼠細胞周期素D3(Cyclin-D3)elisa檢測試劑盒
小鼠細胞周期素D2(Cyclin-D2)elisa檢測試劑盒
小鼠細胞周期素D1(Cyclin-D1)elisa檢測試劑盒
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小鼠細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)elisa檢測試劑盒


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