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甲基化CpG結(jié)合蛋白2抗體的生物素化標(biāo)記實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)

發(fā)表時間:2021-09-17
甲基化CpG結(jié)合蛋白2抗體的生物素化標(biāo)記實(shí)驗(yàn)要點(diǎn):
1.如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標(biāo)記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當(dāng)則影響標(biāo)記的效率,應(yīng)先用幾個不同的分子比來篩選最適條件;
3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點(diǎn)可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活;
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;
5.當(dāng)游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)時,或位于酶的催化位點(diǎn)時,生物素化會降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性;
6.生物素還可能與不同的功能基團(tuán),如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價結(jié)合;
7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生物素會對生物素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競爭作用;

8.在細(xì)胞的熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細(xì)胞可導(dǎo)致高本底。

芳香化酶/細(xì)胞色素P450/雌激素合成酶抗體
腺苷A2A受體抗體
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頂膜鈉依賴性膽鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體
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芳香乙酰胺脫乙?;笜拥鞍?抗體
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雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體(N端)
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肌動蛋白α/α-SMA/α Actin抗體
ATP結(jié)合蛋白家族7抗體
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磷酸化脊髓小腦失調(diào)癥蛋白1抗體
磷酸化活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
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